miR-1277-5p/UBASH3A在类风湿关节炎中的功能及其靶标验证

摘要：

目的 研究miR-1277-5p、含clip结构域的丝氨酸蛋白酶(UBASH3A)在类风湿关节炎(RA)滑膜细胞中的增殖、凋亡调控功能及其作用关系.方法 运用组织块和酶消化法分离滑膜细胞;脂质体法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-1277-5p组(转染miR-1277-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-1277-5p组(转染anti-miR-1277-5p)、pcD-NA组(转染pcDNA)、pcDNA-UBASH3A组(转染pcDNA-UBASH3A)、si-NC组(转染si-NC)、si-UBASH3A组(转染si-UBASH3A)、miR-1277-5p+pcDNA组(共转染miR-1277-5p mimics和pcDNA)、miR-1277-5p+pcDNA-UBASH3A组(共转染miR-1277-5p mimics和pcDNA-UBASH3A)、anti-miR-1277-5p+si-NC组(共转染anti-miR-1277-5p和si-NC)、anti-miR-1277-5p+si-UBASH3A组(共转染anti-miR-1277-5p和si-UBASH3A)转染至RA滑膜细胞.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹、细胞计数试剂盒(CCK)-8、流式细胞术检测细胞miR-1277-5p、UBASH3A的mRNA表达水平,增殖细胞核抗原(PCNA)、P16、凋亡抑制蛋白(XIAP)、裂解DNA修复酶(cleaved-PARP)的蛋白表达水平,细胞增殖率和凋亡率.双荧光素酶报告实验检测细胞荧光素酶活性.结果 正常滑膜细胞相比,RA滑膜细胞中miR-1277-5p mRNA水平明显降低,UBASH3A mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.01);过表达miR-1277-5p、敲减UBASH3A具有明显抑制RA滑膜细胞增殖,明显促进凋亡的作用,并明显下调PCNA和XIAP,明显上调P16和cleaved-PARP(均P<0.05),而抑制miR-1277-5p、过表达UBASH3A则具有相反的作用(P<0.05).miR-1277-5p可明显抑制野生型UBASH3A细胞的荧光活性,并负向调控UBASH3A表达(P<0.05).过表达UBASH3A可部分逆转miR-1277-5p对RA滑膜细胞增殖、凋亡的调控,敲减UBASH3A可部分逆转抑制miR-1277-5p对RA滑膜细胞增殖、凋亡的调控(P<0.05).结论 miR-1277-5p可抑制RA滑膜细胞增殖,促进凋亡,其机制与靶向UBASH3A相关.

关键词：miR-1277-5p、UBASH3A、类风湿关节炎

所属期刊栏目：42

分类号：R245.81(中医临床学)

在线出版日期：2022-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：3802-3807