补肾益肝活血方含药血清对ERK/p38 MAPK信号通路的影响

摘要：

目的 观察补肾益肝活血方含药血清对骨关节炎的细胞外信号调节激酶(ERK)/p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路的影响.方法 40只雌性SD大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只;补肾益肝活血方含药血清的制备:给予大鼠补肾益肝活血方3.2 g/(kg·d)灌胃,连续灌胃5 d,每日给药2次,最后一次灌胃后3 h,对SD大鼠进行腹主动脉采血,制备血清;软骨细胞分离:取新生SD乳大鼠肋骨处的软骨;原代培养:将清洗干净的软骨用0.2％Ⅱ型胶原蛋白酶和10％的胰蛋白酶消化后进行细胞传代;软骨细胞的鉴定:包括细胞形态观察、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色;退变软骨细胞模型的建立及含药血清干预:将传至第2代的软骨细胞予10 ng/ml白细胞介素(IL)-1β 诱导获得退变的软骨细胞,诱导退变24 h后弃培养液,分4组,分别用低、中、高剂量的补肾益肝活血方含药血清及20％空白血清进行干预,每组每个时间段设置6个复孔,做好标记及记录,分别于培养24 h、36 h、48 h后取1板运用MTT法检测干预后软骨细胞的活性,确定干预软骨细胞的最佳量效与时效关系;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中IL-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平;Westem印迹法检测蛋白.结果 在IL-1β诱导下,体外培养的大鼠关节软骨细胞退化,p38MAPK增高,与对照组相比,中、高剂量组的ERK、p38MAPK表达均显著下降(P<0.05).结论 ERK、p38MAPK参与并介导了骨关节炎的发生和发展;补肾益肝活血方能够通过下调p38MAPK基因的表达,改善IL-1β介导的关节软骨细胞退化模型的软骨细胞进一步的退化.

关键词：补肾益肝活血方、骨关节炎、软骨细胞、细胞外信号调节激酶信号通路、p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路、白细胞介素-1β

所属期刊栏目：39

分类号：R274.3

资助基金：江苏省中医药局科技项目yb2015047

在线出版日期：2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：4535-4540