人中性粒细胞对结核分枝杆菌杀伤活性的检测方法

摘要：

目的：探讨用FDA标记Mtb的最佳浓度，观察不同化学试剂和温度对FDA标记率的影响及PMNs杀伤 Mtb的活性。方法用不同浓度荧光素二醋酸酯（ FDA）标记Mtb，选取最佳标记浓度，在0℃冰浴，37℃、65℃和95℃水浴中孵育30 min，或与不同百分比的乙醇、甲醛和多聚甲醛（ PFA）试剂在室温下孵育30 min后洗涤，用流式细胞术检测标记率和荧光强度（ MFI）；Percoll分离获得 PMNs与FDA标记的 Mtb于37℃孵育7 min，洗涤，加入自体血清，置37℃孵育0～60 min，计算PMNs对Mtb的杀伤率。结果 Mtb用不同浓度FDA在PBS中标记的标记率分别从由85％增加到99％，MFI分别从45增加到1506；在0℃冰浴，37℃、65℃、95℃水浴作用30 min后，FDA－Mtb的标记率从0℃的99％下降至95℃的0．21％， MFI从0℃的2015下降至95℃时的87；FDA标记的Mtb与不同比例的常规化学试剂乙醇、甲醛、多聚甲醛分别作用30 min后，FDA－Mtb的MFI在各组均显著降低（P＜0．01）；FDA标记的 Mtb与分离 PMNs在37℃作用0 min、10 min、30 min和60 min，PMNs杀伤 Mtb的百分率分别是11．37％、12．02％、27．20％、58．44％。结论流式细胞术能快速准确地检测PMN对FDA标记Mtb的杀伤活性，且杀伤活性随时间延长而增强。

关键词：中性粒细胞、结核分枝杆菌

分类号：R378(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：感染与免疫安徽省重点实验室蚌埠医学院开放课题BYKL1302

在线出版日期：2015-11-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：5689-5691