10.3969/j.issn.1005-9202.2015.15.034
蛋白激酶SGK3基因的克隆及其在乳腺癌细胞中的表达
目的:探讨通过克隆蛋白激酶(SGK)3基因并将其转染乳腺癌MCF-7细胞建立高表达SGK3的MCF-7细胞系的稳态性。方法利用真核表达载体N-端增强型绿色荧光蛋白(pEGFP-N1)通过基因克隆技术构建重组质粒,通过菌落PCR和DNA测序方法对重组质粒进行鉴定。通过PEI介导将重组质粒pEGFP-N1-SGK3转染至乳腺癌MCF-7细胞中,荧光显微镜和 Western印迹方法对基因转染效率以及融合蛋白 GFP-SGK3的表达进行鉴定。结果成功构建了真核表达质粒,将其命名为pEGFP-N1-SGK3;在荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光,表明获得了较高的转染效率;Western印迹结果显示,在转染pEGFP-N1-SGK3的细胞中可见阳性条带,而MCF-7亲本细胞和转染空载体的对照组细胞无阳性条带。结论成功构建了重组质粒pEGFP-N1-SGK3,获得了稳定表达融合蛋白GFP-SGK3的MCF-7细胞系,可用于后续SGK3细胞内功能的研究。
糖皮质激素调节蛋白激酶3、基因克隆、乳腺癌
R73-3(肿瘤学)
齐齐哈尔市科学技术计划项目SFGG-201337
2015-08-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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