大鼠PAX2基因RNA干扰慢病毒载体的构建及沉默效果

摘要：

目的：构建PAX2特异性shRNA 干扰慢病毒载体并观察其对大鼠肾小管上皮细胞（ NRK52E）中PAX2基因的沉默效果。方法采用PAX2基因 RNAi靶点序列合成靶序列的 Oligo DNA，退火形成双链 DNA，与pGCSIL-GFP载体连接产生 shRNA慢病毒载体，经 PCR筛选阳性克隆进行 DNA 测序鉴定。用脂质体转染法将质粒共转染293T 细胞，将包装产生的慢病毒颗粒感染NRK52E 细胞，RT-PCR、Western 印迹检测PAX2 mR-NA 和蛋白的表达。结果 PCR与DNA测序证实合成的含PAX2 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。经RNA干扰后的靶细胞PAX2 mRNA及蛋白表达水平明显降低。结论成功构建人PAX2基因RNA干扰慢病毒载体，为以PAX2基因为靶点的梗阻性肾病基因治疗研究奠定了基础。

关键词：PAX2、慢病毒、RNA 干扰

分类号：R725(儿科学)

资助基金：沈阳市科学技术计划项目 F10-205-1-29；辽宁医学院青年科技启动基金项目F2011Z005

在线出版日期：2014-05-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2158-2161