人白细胞介素32γ基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

摘要：

目的 构建人白细胞介素32γ(IL-32γ)基因重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 从表达质粒pDONR223中扩增目的片段IL-32γ,定向克隆至穿梭载体pShuttle-GFP-CMV获得pShuttle-(△GFP)-IL-32γ,经I-CeuI+ I-SceI双酶切处理后转移至腺病毒载体pAdxsi,得到Ad-IL-32γ进行PCR鉴定及滴度测定.将Ad-IL-32γ转染至人胚肾细胞HEK293中,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)确定Ad-IL-32γ的转染效率,并通过Western印迹检测目的基因IL-32γ的表达.结果 目的片段IL-32γ转入穿梭载体后,酶切鉴定pShuttle-(AGFP)-IL-32γ正确.酶切穿梭载体将目的基因片段克隆至腺病毒载体pAdxsi得到Ad-IL-32γ病毒载体,酶切鉴定证实构建成功.Ad-IL-32γ病毒滴度为2×1010pfu/ml.转染HEK293细胞通过观察GFP判断转染效率,并通过Western印迹证实其在HEK293中的表达.结论 成功构建IL-32γ重组腺病毒载体并证实其能在体外有效表达IL-32γ蛋白,为进一步基于Ad-IL-32γ的基因治疗研究奠定基础.

关键词：人白细胞介素32γ、腺病毒、基因治疗

所属期刊栏目：33

分类号：R73(肿瘤学)

在线出版日期：2014-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：5906-5908