半合成-酶连法克隆EFsec基因及其初步表达分析

摘要：

目的 将缺失一段编码序列的真核硒代半胱氨酸tRNA特异性延伸因子(EFsec)基因补齐,并克隆到真核表达载体进行初步表达分析.方法 采用人工合成法合成所缺失的基因片段,然后利用EFsec-基因序列中靠近5′端存在的天然酶切位点进行酶连,再用PCR方法扩增出拼接产物,并将其克隆到pcDNA3 1(-)载体.采用脂质体转染法转染HEK293T细胞后应用RT-PCR法检测EFsec基因的表达.结果 准确快捷地将EFsec基因补齐了其5′端缺失的基因序列,并成功地构建了其表达质粒pcDNA3.1-EFte,转染哺乳动物细胞后检测到了 EFsec基因的显著表达.结论 半合成-酶连法可以高效快捷地朴齐并克隆缺失的EFsec-基因,提供了一种拼接基因的有效策略和方法,同时也为EFsec基因的下一步研究奠定了基础.

关键词：半合成-酶连法、克隆、表达、EFsec、硒蛋白

所属期刊栏目：32

分类号：R285;Q255(中药学)

资助基金：黑龙江省卫生厅项目2010-482;佳木斯大学重点科研项目Szj2008-013;佳木斯大学研究生创新项目YJSCX2011-013JD

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1868-1870