人前列腺特异性膜抗原基因重组腺病毒的构建及其表达

摘要：

目的 体外构建含有人前列腺特异性膜抗原(PSMA)基因的重组腺病毒载体,并检测其在HEK293细胞中的表达.方法 设计一对含有SfiI酶切位点的PSMA基因上下游引物,以质粒pCMV-SPORT6/PSMA为模板,通过PCR扩增获得PSMA基因全序列.片段回收后经酶切处理,连接到穿梭质粒pShuttle-CMV-EGFP上,获得重组穿梭质粒pShuttle-EGFP-PSMA.经SfiI酶切、PCR及插入片段测序鉴定正确后,将其用I-CeuI和I-SceI双酶切处理,转移到pAdxsi载体上,得到pAdxsi-GFP-PSMA病毒质粒,线性化后经HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒Ad-PSMA,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,RT-PCR,Western印迹检测目的基因人PSMA的表达.结果 成功构建了含有人PSMA基因的重组腺病毒,病毒滴度为2×1010 pfu/ml.Western印迹检测可见PSMA蛋白的正确表达.结论 该重组腺病毒载体的成功构建及表达,为下一步以人PSMA作为靶抗原构建DC疫苗和基因免疫治疗奠定基础.

关键词：腺病毒、基因表达、前列腺特异性膜抗原(PSMA)

所属期刊栏目：31

分类号：R737.2(肿瘤学)

资助基金：辽宁省科技厅科学技术计划项目2010225034

在线出版日期：2012-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：4864-4867