降钙素基因相关肽衍生物的优化表达及纯化

摘要：

目的 优化重组降钙素基因相关肽衍生物(CGRP-VY)蛋白的表达体系,并利用亲和层析获得高纯度的重组蛋白.方法 在前期研究的基础上,将构建的pET-32a(+)-rhCGRP-VY在大肠埃希菌中表达,分别对时间、温度和IPTG的浓度进行优化.采用Ni-NTA亲和层析柱分离纯化可溶性蛋白,YLN凝胶影像分析系统和Bradford法检测纯化蛋白的纯度与含量.结果 重组蛋白的最佳表达条件为诱导时间4 h、诱导温度37℃、IPTG浓度0.75 mmol/L,重组蛋白的最高表达量占菌体总蛋白的70%～80%,高效表达的CGRP-VY融合蛋白大部分可溶,纯化后蛋白纯度可达90%以上,蛋白浓度约为0.09 mg/ml.结论 成功优化了蛋白表达条件,并用亲和层析法纯化出大量可溶性TrxA-rhCGRP-VY.

关键词：降钙素基因相关肽衍生物、VY、优化、纯化

所属期刊栏目：30

分类号：Q781(基因工程（遗传工程）)

资助基金：黑龙江省教育厅资助项目11521097

在线出版日期：2010-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：2475-2477