β分泌酶原核表达载体的构建、表达及融合蛋白纯化

摘要：

目的 构建小鼠β分泌酶原核表达载体并诱导其表达和纯化,为进一步研究β分泌酶的作用奠定基础.方法 根据基因文库中小鼠β分泌酶基因的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR方法扩增到β分泌酶的cDNA片段,克隆进原核表达载体pET-28a中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),测序鉴定后,通过IPTG诱导表达出目的 蛋白,经亲合层析纯化.结果 从小鼠的脑组织RNA中扩增出特异的β分泌酶基因片段长1 506 bp,经酶切鉴定及DNA序列测定,证实重组载体pET28a-BACE构建正确,表达融合蛋白分子量约为55 kD,经镍离子亲合柱层析纯化获得电泳级纯度的目的 蛋白.结论 在大肠杆菌中获得了小鼠β分泌酶的高效表达,为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础.

关键词：β分泌酶、大肠杆菌、表达、融合蛋白

所属期刊栏目：29

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省高校自然科学重大基础研究项目07KJA36029;徐州师范大学自然科学研究基金项目05XLA10;徐州师范大学博士启动基金项目KY200610

在线出版日期：2009-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1483-1485