人Tum-5基因逆转录病毒载体及包装细胞株的构建

摘要：

目的 构建携带Tum-5基因的逆转录病毒载体并对其进行包装,获得稳定的产毒细胞系.方法 采用RT-PCR法从胎肾组织中扩增Tum-5基因片断,并将其定向克隆到逆转录病毒载体pLXSN中进行PCR、双酶切和测序鉴定.利用电穿孔方法 将获得的重组质粒转染PA317细胞,经G418 筛选抗性克隆,收集病毒上清后感染NIH3T3 细胞测定病毒滴度.结果 PCR、酶切证实Tum-5基因克隆至逆转录病毒载体pLXSN,Tum-5基因测序结果 和原始序列相同.重组逆转录病毒载体转染PA317 包装细胞,RT-PCR证实转染后的PA317细胞上清液中存在携带人Tum-5基因的病毒RNA,病毒滴度为2.05×104cfu/ml.结论 成功的构建了携带人Tum-5基因的逆转录病毒载体,获得了稳定的产毒细胞系.

关键词：Tum-5基因、pLXSN、基因治疗、抗血管生成、逆转录病毒载体

所属期刊栏目：29

分类号：R730(肿瘤学)

资助基金：吉林省卫生厅重点实验室科研课题2005106

在线出版日期：2009-06-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1194-1196