10.3969/j.issn.1005-9202.2009.02.020
人LIMK1基因荧光真核表达载体的构建及在人成骨肉瘤MG63细胞中的表达
目的 构建并表达人LIMK1与绿色荧光蛋白(EGFP-C1)的融合蛋白EGFP-LIMK1,并监测其在人成骨肉瘤MG63细胞内的表达及活性.方法 利用基因重组技术将LIMK1与绿色荧光蛋白融合并构建真核细胞表达质粒,通过脂质体介导法导人人成骨肉瘤MG63细胞内,用荧光显微镜观察LIMK1基因表达情况,通过Westernblot检测其在MG63细胞中的活性.结果 双酶切鉴定证实LIMK1片段已克隆到pEGFP-C1载体的Kpn Ⅰ和Not Ⅰ位点之间,测序结果证实了插入片段的正确性,转染MG63细胞后,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达;Western blot检测证实LIMK1在MG63细胞中活性上调.结论 成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的LIMK1真核表达载体并检测到其在真核细胞MG63中的表达及活性.
转染、LIMK1、MG63
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R738.1;R361+.3(肿瘤学)
吉林省科技厅白求恩专项基金200705295;吉林省科技厅国际合作项目20080723;国家自然科学基金资助项目30772488
2009-03-31(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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