人HER2/neu胞外区在毕赤酵母中的表达及鉴定

摘要：

目的 在毕赤酵母中高效表达HER2/neu 胞外区,制备具有与天然HER2/neu相同结构和生物学活性的重组人HER2/neu 胞外区(rhHER2/neu ECD).方法 用RT-PCR法自人Mrna中克隆her2/neu ECD基因,构建真核表达载体pPICZα/her2/neu ECD.经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33.用PCR法筛选基因转染后Zeocin抗性阳性的克隆,用SDS-PAGE法筛选高表达HER2/neu ECD工程菌,用Western印迹法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的HER2/neu ECD.结果 经RT-PCR法克隆的her2/neu ECD 基因序列与GenBank登录的Cdna序列一致.将her2/neu ECD 基因定向插入pPICZα,构建pPICZα/her2/neu ECD真核表达载体,经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆.SDS-PAGE和Western印迹法分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HER2/neu ECD,分子量110 kDa.HER2/neu ECD表达量达120 mg/L.结论 克隆her2/neu ECD基因并构建和筛选出高效表达HER2/neu ECD的毕赤酵母工程菌.

关键词：her2/neu ECD、基因表达、毕赤酵母

所属期刊栏目：28

分类号：Q78;Q815(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2004AA205020

在线出版日期：2008-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：631-633