人铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

摘要：

目的 构建人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,Zn-SOD)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的 蛋白,为其临床应用奠定基础.方法 根据已报道的hCu,Zn-SOD基因序列,采用RT-PCR技术从外周血单个核细胞(PBMC)中获得SOD cDNA序列.将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,重组质粒经酶切,PCR及测序鉴定正确后,将目的 片段插入原核表达载体PET20 b(+)中并转化大肠杆菌DE3,通过IPTG诱导表达出目的 蛋白,经镍固定金属亲和层析纯化.采用邻苯三酚自身氧化法测定SOD生物学活性.结果 序列分析表明SOD基因成熟肽编码区含有465 bp与GenBank(X02317)中已报道序列一致的SOD核苷酸.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示表达的目的 蛋白分子质量约为19 kD并与商品化的人SOD单抗呈特异性反应.经Ni2+-NTA琼脂糖纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带.可溶蛋白酶活力达1 300 U/ml.结论 在大肠杆菌中获得了人SOD的高效表达,为研究其生物学功能和广泛应用奠定了基础.

关键词：人超氧化物歧化酶、表达纯化、大肠杆菌

所属期刊栏目：28

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省杰出青年资助基金20050113;吉林省科技厅国际合作项目20060722

在线出版日期：2008-05-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：434-436