人热休克蛋白110在毕赤酵母中的表达及鉴定

摘要：

目的 在毕赤酵母(Pichia pastoris)中高效表达人热休克蛋白110(hHSP110),制备具有与天然hHSP110相同生物活性的重组人HSP110(rhHSP110).方法 用PCR法自质粒pBacPAK中克隆hHSP110的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP110.经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33.用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆,用Western blot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP110,筛选高表达工程菌.结果 经PCR法克隆的hHSP110 DNA序列与GeneBank登录的cDNA序列一致.将hHSP110 DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP110真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的阳性克隆.SDS-PAGE和Western blot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP110.rhHSP110表达量达120 mg/L.结论 克隆hHSP110基因并构建和筛选出高效表达rhHSP110的毕赤酵母工程菌,表达的rhHSP110具有天然rhHSP110相同的生物活性.

关键词：重组人热休克蛋白110(rhHSP110)、基因表达、毕赤酵母

所属期刊栏目：27

分类号：Q78;Q815(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2007-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：732-734