环状RNA circ_BRAF_2在子痫前期胎盘滋养细胞自噬中的作用

摘要：

目的 研究子痫前期(PE)患者胎盘组织中环状RNA circ_BRAF_2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响.方法 选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例;将HTR-8/SVneo细胞分为对照组(常规培养)、pLV-NC组(转染空载体)、pLV-circ_BRAF_2组(转染circ_BRAF_2)、缺氧组(缺氧处理)、pLV-NC+缺氧组(转染空载并进行缺氧处理)、pLV-circ_BRAF_2+缺氧组(转染circ_BRAF_2并进行缺氧处理).用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胎盘组织及HTR-8/SVneo细胞中circ_BRAF_2的表达,用PCR及Sanger测序对HTR-8/SVneo细胞中circ_BRAF_2进行鉴定,用核质分离法检测circ_BRAF_2在HTR-8/SVneo细胞胞质和细胞核中的表达,用透射电镜观察细胞自噬体的形成,用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的表达.用qRT-PCR检测miR-15a-5p的表达水平.结果 妊娠对照组、PE组、对照组及缺氧组circ_BRAF_2的相对表达水平分别为0.89±0.05,0.32±0.03,0.04±0.05×10-1和0.02±0.03×10-1,PE组与妊娠对照组相比,缺氧组与对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);通过外扩型引物只能在cDNA中扩增出circ_BRAF_2,而采用内扩型引物能同时在cDNA和gDNA中扩增出其线性转录本BRAF;circ_BRAF_2在HTR-8/SVneo细胞胞质中的表达(0.02±0.02×10-1)显著高于在胞核中的表达(0.02×10-2±0.03×10-3,P<0.01);对照组、pLV-NC组、pLV-circ_BRAF_2组、缺氧组、pLV-NC+缺氧组、pLV-circ_BRAF_2+缺氧组LC3-Ⅱ蛋白相对表达水平分别为0.75±0.25,0.73±0.23,0.75±0.23,1.17±0.30,1.19±0.32和0.42±0.06,P62蛋白相对表达水平分别为0.72±0.07,0.75±0.09,0.72±0.08,0.45±0.11,0.44±0.10和0.62±0.07,缺氧组的上述指标与对照组相比,pLV-circ_BRAF_2+缺氧组的上述指标与pLV-NC+缺氧组相比,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);这6组的单个细胞内自噬体数量变化及miR-15a-5p的相对表达水平变化与LC3-Ⅱ蛋白表达变化水平相同.结论 过表达circ_BRAF_2可抑制缺氧诱导的HTR-8/Svneo细胞自噬,其作用可能与竞争性结合miR-15a-5p有关.

关键词：子痫前期、环状RNA circ_BRAF_2、滋养细胞、微小RNA-15a-5p、自噬

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分类号：R97(药品)

资助基金：国家自然科学基金;宁夏自然科学基金资助项目;宁夏自然科学基金资助项目;宁夏回族自治区重点研发计划重点基金资助项目;宁夏回族自治区重点研发计划重点基金资助项目

在线出版日期：2022-12-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2860-2864