10.13699/j.cnki.1001-6821.2021.17.010
鞘氨醇-1-磷酸信号激活对乳腺癌MCF-7细胞增殖作用机制研究
目的 研究鞘氨醇-1-磷酸(S1P)信号激活在乳腺癌MCF-7细胞增殖中的作用及其机制.方法 (1)将细胞分为空白组和低、中、高3个浓度实验组,实验组用SEW2871(S1P受体激动剂)处理乳腺癌细胞72 h.四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖.(2)将转染的乳腺癌细胞分为3组:第1转染组、第2转染组和第3转染组.第1转染组(空白质粒转染组)加入慢病毒空白质粒3μL(滴度5.0×1012 copy·mL-1),第2转染组(野生型S1P受体过表达组)加入野生型S1P受体基因慢病毒质粒3μL(滴度5.0×1012 copy·mL-1),第3转染组(S1P受体磷酸化位点突变过表达组)加入S1P受体磷酸化位点突变基因慢病毒质粒3μL(滴度5.0×1012 copy·mL-1).(3)以第1,2和第3转染组细胞作为对照,分别加入W146(S1P受体拮抗剂)、MK2206(Akt信号通路抑制剂)干预.用四甲基偶氮唑蓝法和平板克隆集落形成实验,检测S1P受体过表达、S1P受体阻断及信号通路抑制剂的增殖水平,蛋白质印迹法检测磷酸化信号传导与转录激活因子-3(p-STAT3)蛋白表达.结果 (1)空白组和低、中、高3个浓度实验组细胞增殖比率分别为1.00±0.06,1.12±0.14,1.21±0.06和1.07±0.05,中浓度实验组与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);(2)第1、2和第3转染组细胞增殖比率分别为1.00±0.18,1.29±0.04和1.40±0.15,第2、3转染组与第1转染组比较,差异有统计学意义(P<0.05).应用W146后,这3组细胞增殖比率分别为1.07±0.06,1.15±0.07和1.11±0.06,第2、3转染组与相应对照比较,差异有统计学意义(P<0.05);第1、2和第3转染组细胞克隆形成数量分别为104.67±13.05,142.67±9.87和131.33±5.86,第2、3转染组与第1转染组比较,差异有统计学意义(P<0.05);应用MK2206后,这3组细胞克隆形成数量分别为(11.33±4.04),(31.00±9.85)和(24.00±7.00)个,第1、2和第3转染组与相应对照比较,差异有统计学意义(P<0.01);(3)应用MK2206后,第1、2和第3转染组的p-STAT3蛋白表达分别为0.83±0.12,0.84±0.09和0.92±0.07,第3转染组与相应对照比较,差异有统计学意义(P<0.05).第2、3转染组分别与相应对照比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 S1P信号激活可促进乳腺癌MCF-7细胞增殖,其机制可能与STAT3信号通路有关.
鞘氨醇-1-磷酸(S1P)、乳腺癌、细胞增殖、S1P受体激动剂、S1P受体拮抗剂
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R97(药品)
齐齐哈尔医学科学院基金资助项目QMSI2017B-07
2021-09-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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