HPLC-RF测定小鼠肝微粒体中CYP2A5的酶活性

摘要：

目的 以香豆素为探针底物建立测定小鼠肝微粒体中CYP2A5酶活性的方法.方法 用Waters Symmetry C18柱；流动相为0.1％醋酸-乙腈=70∶ 30;流速为1.0 mL·min-1,柱温30℃,Ex=340 nm,Em =458 nm.香豆素与小鼠肝微粒体在37℃孵育20 min,加入含内标的冰乙腈终止,4℃、12000 r·min-1离心15 min,取上清液,用HPLC测定其代谢产物7-羟基香豆素的含量,以GraphPad Prism 5.0作图计算酶动力学参数.结果 7-羟基香豆素与内标两者分离良好.7-羟基香豆素的检测限为2nmol · L-1(S/N≥3),线性范围为8～ 800 nmol·L-.日内日间精密度RSD小于5％,回收率为91.3％～101.4％.香豆素羟化反应的Km为2.15 μmol·L-1；Vmax为9.74 pmol·(min·mg protein)-1.结论 该方法稳定可靠,灵敏度高,适于体外CYP2A5酶活性的测定.

关键词：高效液相色谱-荧光检测法、细胞色素P4502A5、香豆素、7-羟基香豆素、小鼠肝微粒体

所属期刊栏目：29

分类号：R969.1;R965.2(药理学)

资助基金：国家科技重大专项基金资助项目2010ZX09401-306-1-1;重庆科技创新能力建设项目基金资助项目CSTC,2010AA5058

在线出版日期：2013-11-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：692-694,697