真核表达载体pcDNA3.1-3a的构建及其在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中的表达

摘要：

目的 在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc/his标签的甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,并在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中进行验证,以期获得可表达甲基化酶催化结构域的融合基因.方法 以甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc/his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc/his标签序列的目的 区段-甲基化酶催化结构域3a,将其克隆入真核表达载体peDNA3.1;以EcoR I、EcoR V双酶切和PCR方法对构建的表达载体进行鉴定,并通过测序证明载体构建正确,同时检测甲基化酶3a在SK-N-SH细胞中的表达.结果 通过PCR方法获得了含有甲基化酶催化结构域的真核表达载体pcDNA3.1-3a,并通过免疫印记方法验证了在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞样品中用抗his标签抗体可以特异性识别目的 蛋白.结论 正确构建了甲基化酶表达载体pcDNA3.1-3a,其可在神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞中表达.

关键词：DNA甲基化酶、真核表达载体、神经母细胞瘤

所属期刊栏目：16

分类号：R730.264;R730.231(肿瘤学)

在线出版日期：2011-12-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：541-544