Beclin 1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对N2a细胞增殖的影响

摘要：

目的构建抑制自噬基因Beclin1 shRNA慢病毒载体，建立Beclin1基因稳定干扰的N2a细胞株，探讨抑制Beclin1对N2a细胞增殖的影响。方法根据小鼠Beclin1基因mRNA序列，设计4个Beclin 1靶点并构建shRNA慢病毒质粒。构建好的Beclin1 shRNA质粒与包装质粒psPAX2及包膜质粒pMD2.G共转染293FT细胞后得到病毒颗粒，将产生的病毒颗粒感染N2a细胞。通过荧光定量PCR和Western blot检测感染的N2a细胞中自噬基因Beclin1 mRNA及蛋白表达水平，比较shRNA的干扰效率。利用CCK8法检测干扰Beclin 1表达对N2a细胞增殖的影响。结果成功构建了表达Beclin 1 shRNA的慢病毒载体。在稳定感染Beclin 1 shRNA慢病毒载体的N2a细胞中，Beclin 1表达显著降低。抑制Beclin 1表达有促进N2a细胞增殖的趋势，但差异无统计学意义。结论成功构建了自噬基因Beclin 1 shRNA慢病毒表达载体，可显著抑制N2a细胞中Beclin 1表达。抑制Beclin 1表达有可能促进N2a细胞的增殖。

关键词：Beclin 1、自噬、基因、短发夹RNA、脑缺血

分类号：R741;R743(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目编号31171014和编号:31371065；上海市卫生局科研课题基金资助项目编号:20134125；上海市浦东新区卫计委重点专科建设基金资助项目PDZz2013-10

在线出版日期：2014-11-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：489-495