Runx2重组慢病毒感染骨髓间充质干细胞并促进其成骨分化的研究

摘要：

目的：利用重组Runx2基因的慢病毒感染大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），使其Runx2基因的表达水平提高，观察BMSCs成骨相关基因的表达情况，研究Runx2基因促进BMSCs的成骨分化情况。方法 PCR扩增Runx2基因，并连接到慢病毒表达载体质粒Pez-lv201，与包装质粒共转染293T细胞进行包装，测得慢病毒液滴度。取4周龄SD大鼠胫骨，分离、培养BMSCs，流式细胞仪鉴定。将Runx2重组慢病毒感染BMSCs。显微镜下观察细胞形态变化；RT-PCR分析BMSCs成骨基因的表达情况。结果 Runx2基因重组慢病毒表达载体质粒酶切和测序鉴定正确。测得慢病毒液滴度为1.6×109 TU/ml。流式细胞仪检测表面抗原CD90和CD105，表达率为99.8%、99.3%。重组慢病毒感染后实验组细胞形态呈成骨样细胞改变；对照组未见明显变化。实验组Runx2、OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因的表达水平随时间推移而增高；对照组上述基因均无明显表达。结论利用Runx2重组慢病毒感染BMSCs，使其高表达Runx2基因，可以使OCN、osteonectin、ALP、BMP-2、OPN基因表达增强，说明Runx2基因可以促进BMSCs向成骨方向分化。

关键词：组织工程、Runx2、骨髓间充质干细胞、慢病毒载体

分类号：R329.2;Q819(人体形态学)

资助基金：广东省自然科学基金s2012010008129;深圳市战略新兴产业发展专项资金项目ZDSY20120614154551201;深圳市科技研发资金项目CXZZ20120614160234842;深圳市科技研发资金项目JCYJ20130401113330839;深圳市科技研发资金项目CXZZ20130321152713220;深圳市重点实验室提升项目CXB201104220049A;广东省大学生创新训练项目1056013089

在线出版日期：2015-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：311-315