重组枯草芽孢杆菌分泌表达缺陷假单胞菌磷酸三酯酶及其发酵优化

摘要：

磷酸三酯酶(phosphotriesterase,PTE,EC3.1.8.1)能够水解有机磷化合物,但其应用一直受限于酶表达量低的问题.为了获得高效表达的有机磷水解酶,本文构建了PTE基因来源于缺陷假单胞菌(Pseudomonas diminuta)的重组枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WB600),并采用单因素实验和正交实验对培养基进行优化,确定了重组菌产酶的最佳发酵条件,同时检测重组酶对有机磷类化合物的降解作用.结果表明,最优的培养基组成为蔗糖(40 g/L)、酵母膏(40 g/L)、蛋白胨(20 g/L)、磷酸氢二钾(2 g/L)、硫酸锰(1g/L)、硫酸镁(6g/L).经测定,该酶4h内对(5 mg/mL的甲基对硫磷、乐果以及神经毒剂模拟剂甲基磷酸二甲酯(dimethyl methyl phosphonate,DMMP)的降解率分别达到98％,92％,73％,且DMMP在12h内也完全降解.本文实现了PTE的胞外分泌表达,为研制有机磷化合物的酶基消毒剂提供了技术支持.

关键词：磷酸三酯酶、枯草芽孢杆菌、发酵条件优化、有机磷化合物、降解率

所属期刊栏目：49

资助基金：陆军装备预先研究项目30110020401

在线出版日期：2019-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：625-636