银耳芽孢完整细胞高效转化体系的建立

摘要：

银耳(Yremella fuciformis)属于高等担子菌,其担孢子芽殖产生酵母状分生孢子称为银耳芽孢.银耳芽孢单核,能像酵母那样快速生长且容易培养,具备优良外源基因表达宿主的特点.本研究以gpd-Gl启动子分别与绿色荧光蛋白基因gfp和潮霉素抗性基因hpf连接构建表达载体pGlg-gfp和pGlq-hph;设置潮霉素浓度梯度在3种培养基中对银耳芽孢的敏感性进行测定,结果表明银耳芽孢在不同的培养基上对潮霉素的敏感性不同,在MA培养基上其最低敏感浓度为5 μg/mL;采用电击法把pGlq-hph质粒转化进银耳芽孢完整细胞,假定转化子经MA筛选培养基筛选,结果表明银耳芽孢完整细胞电击转化的最佳参数为:STM电击缓冲液、银耳芽孢浓度1.0×108个/mL电击体积200μL,表达质粒6μg,电击电压2.0 kV/cm,电击后采用MB液体培养基静置预培养48 h,转化率达277个/μg DNA.采用最佳电击参数把质粒pGlg-gfp和pGlg-hph按1:1共转化银耳芽孢,转化子经过筛选培养基筛选、PCR鉴定及Southern杂交验证,结果表明受鉴定的8个转化子中有3个整合了gfp基因,其共转化率为37.5%.这3个gfp基因转化子的芽孢在激光荧光显微镜下可观察到发出强烈的荧光,表明了外源gfp基因能够在银耳芽孢中获得高效率的表达.

关键词：银耳(Tremella fuciformis)、电击转化、银耳芽孢、完整细胞、基因表达、hph基因、gfp基因

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分类号：Q94(植物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA10Z301;国家自然科学基金30371000;30671457;广东省自然科学基金032239

在线出版日期：2009-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：974-981