温敏核不育水稻5460S细菌人工染色体文库的构建和鉴定

摘要：

为了构建温敏核不育(TGMS)基因区域的精细物理图谱并最终分离TGMS基因,以温敏核不育水稻5460S为材料,摸索优化了构建植物细菌人工染色体(BAC)文库的方法,构建了一个高质量的BAC文库. 该文库由19 584个克隆构成,插入片段平均长度为110 kb,相当于水稻单倍体基因组大小的5倍;以分子量分别为140和250 kb的2个大BAC克隆进行稳定性传代实验,经100代传代后其插入的DNA片段仍然稳定存在;以线粒体和叶绿体基因为探针筛选BAC文库,未检验出叶绿体和线粒体DNA的污染;以和tms1基因连锁的3个分子标记作为探针对BAC文库进行了筛选,每个探针至少可获得一个阳性克隆,利用热不对称性交错PCR(Tail-PCR)法成功分离了阳性克隆的左右末端序列.

关键词：水稻、温敏核不育基因、细菌人工染色体文库、热不对称性交错PCR

所属期刊栏目：29

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家科技攻关项目;美国洛克菲勒兄弟基金会资助项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：518-524