稳定表达人FcγRⅡA的HEK293T细胞系的建立及其功能鉴定

摘要：

构建稳定表达FcγRⅡA（CD32a）的人胚肾293T细胞系及其相应的对照细胞系 FcγRⅡB（CD32b），FcγRⅡA（Y288F／Y304F）[（CD32a（Y288F／Y304F）]，作为进一步研究FcγRⅡA介导的信号通路的基础。首先，从人外周血单核细胞cDNA中扩增CD32a和CD32b ，并构建pMSCVegfp‐CD32a及pMSCVegfp‐CD32b逆转录病毒表达载体。另外，将构建成功的pMSCVegfp‐CD32a 288和304位点的酪氨酸（Y）突变成苯丙氨酸（F），得到pMSCVegfp‐CD32a（Y288F／Y304F）表达载体。构建成功的逆转录病毒载体经酶切、测序鉴定后，与pcl‐amp辅助载体共同转染HEK 293T细胞进行病毒包装。病毒感染HEK 293T 细胞后通过流式分选得到稳定表达CD32a、CD32b、CD32a（Y288F／Y304F）的HEK 293T细胞系，流式检测各细胞株膜表面的CD32分子表达及白色念珠菌考察各细胞株抗体依赖的内吞作用。结果表明：稳定表达CD32a、CD32b、CD32a（Y288F／Y304F）的 HEK 293T细胞纯度在98％以上，并且膜表面均可检测到CD32的表达。吞噬实验结果表明，HEK 293T‐CD32a细胞呈现对白色念珠菌的吞噬作用，而HEK 293T‐CD32b、HEK 293T‐CD32a（Y288F／Y304F）无吞噬作用。

关键词：医学免疫学、吞噬、载体构建、流式分选

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分类号：R392.1

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20123201110013，20123201120020

在线出版日期：2016-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2110-2114