Native-PAGE 染色法用于过氧化氢酶-3酶活性定量分析

摘要：

通过定量比较过氧化氢酶-3（catalase-3，Cat-3）的酶活性与其蛋白量及mRNA 的关系，确定Native-PAGE 染色法能够直接反映出Cat-3蛋白含量，进而探究该方法用于定性和定量检测Cat-3活性的准确性。采用同源重组的方法进行cat-3基因敲除；通过大肠杆菌表达重组GST-Cat-3蛋白制备多克隆抗体；通过Western blotting 检测、Northern 杂交以及Native-PAGE 染色法对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定量分析。得到cat-3基因缺失突变体；获得特异性很高的Cat-3蛋白的多克隆抗体，并对 H2 O2胁迫处理和未处理的菌丝体中Cat-3表达量进行分析、比较。与Northern 杂交和Western blotting 检测相比，Native- PAGE 染色法能够非常准确地反映出Cat-3蛋白表达量的变化，因而该方法不但能够对粗糙脉孢菌Cat-3的酶活性进行定性分析，还能进行定量分析。

关键词：生物化学、粗糙脉孢菌、过氧化氢酶-3、Native-PAGE、染色法、过氧化氢酶-3 酶活性

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分类号：Q936(微生物学)

资助基金：高等学校博士学科点专项科研基金资助项目20110008110027；国家基础科学人才培养基金资助项目J1103520

在线出版日期：2016-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1398-1402,1430