低强度脉冲超声通过p38/JNK-白细胞介素-6抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖的研究

摘要：

目的:探讨低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis,RA-FLS)异常细胞表型的抑制作用及可能机制.
方法:酶消化法分离滑膜细胞,显微镜下观察细胞形态,同时用免疫荧光检测Vimentin蛋白表达来鉴定RA-FLS.将细胞进行体外培养并分为4组:对照组、LIPUS组、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)组和TNF-α+LIPUS组或3组:对照组、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)组和IL-6+LIPUS组.CCK8和EDU实验分别检测LI-PUS对RA-FLS细胞活性和增殖的作用,划痕实验和Transwell迁移实验观察LIPUS对RA-FLS迁移能力的影响,RT-qPCR检测RA-FLS中重要的细胞因子、趋化因子和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)的基因表达,ELISA进一步检测LIPUS对RA-FLS中关键效应分子IL-6蛋白水平的作用,Western Blot检测LIPUS对RA-FLS中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响.
结果:分离得到较纯净的RA-FLS.在体外培养的RA-FLS中,首先,LIPUS可以抑制TNF-α诱导的细胞活性(P＜0.001)和增殖(P=0.007),但它对其迁移及迁移相关 MMPs(MMP2和MMP9)转录水平的作用在组间无显著性差异(P＞0.05).在TNF-α诱导的炎性环境下,LIPUS能够抑制IL-6和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)在mRNA水平上的高表达(P＜0.001),但其对白细胞介素-lβ(interleukin-1β,IL-lβ)、MMP1和MMP13的抑制作用在组间无显著性差异(P＞0.05).与未处理组相比,LIPUS抑制TNF-α诱导的RA-FLS中IL-6的分泌(P＜0.001),同时也抑制IL-6诱导的RA-FLS增殖(P=0.003).LIPUS能够抑制MAPK信号通路中p38 MAPK(P=0.033)的磷酸化和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的磷酸化(P=0.019),但其对细胞外信号调节激酶 1/2(extracellular signal-regulated kinas 1/2,ERK1/2)蛋白的磷酸化则无显著作用(P＞0.05).
结论:LIPUS能够减少炎性状态下RA-FLS的异常增殖而不作用于其迁移,该作用可能与p38/JNK-IL-6信号通路的抑制有关.

关键词：低强度脉冲超声、类风湿性关节炎、滑膜成纤维细胞、白细胞介素6、增殖

所属期刊栏目：39

分类号：R454.3;R593.2(治疗学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;重庆市自然科学基金;重庆市自然科学基金;重庆医科大学附属第一医院培养基金项目

在线出版日期：2024-02-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：4-14