10.3969/j.issn.1004-406X.2022.09.08
Mettl3介导m6A甲基化修饰对过氧化氢诱导的脊髓神经元氧化应激和凋亡的影响
目的:探讨Mettl3介导m6A甲基化修饰对过氧化氢(H2O2)诱导的脊髓神经元氧化应激和凋亡的影响.方法:分离新生(24h内)SD大鼠脊髓,经消化、离心后重悬沉淀,差速贴壁30min后收集未贴壁细胞培养于Neurobasal培养基中,经免疫荧光鉴定呈03-tubulin阳性,确认为脊髓神经元.将脊髓神经元随机分为6组:空白组,细胞不予任何处理,正常培养;转染对照组,细胞转染阴性对照siRNA(si-NC);转染组,细胞转染Mettl3 siRNA(si-Mettl3);诱导组,细胞采用300μmol/L的H2O2处理;转染对照诱导组,细胞先转染si-NC,然后采用300μmol/L H2O2处理;转染诱导组,细胞先转染si-Mett13,然后采用300μmol/LH2O2处理.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞Mett13的mRNA表达水平,Western blot检测Mettl3、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平,免疫荧光检测Mett13表达,酶标仪检测各组整体m6A水平,并检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:与空白组相比,诱导组的m6A甲基化修饰水平显著提高(P＜0.05),Mettl3 的 mRNA 和蛋白表达水平显著性上调(P＜0.05),IL-1β(73.39±8.82ng/L vs 125.58±15.31ng/L)、IL-6(63.34±7.12ng/L vs 101.28±12.49ng/L)、TNF-α(103.29±12.19ng/L vs 204.37±23.65ng/L)和 MDA(4.01±0.67pmol/L vs 9.23±1.05pmol/L)水平显著性升高(P＜0.05),SOD(28.37±3.72U/mg vs 17.23±2.05U/mg)和 GSH-Px(158.19+19.26U/mg vs 83.35±9.05U/mg)水平显著性降低(P＜0.05),且 Bax 和 cleaved Caspase-3 的蛋白表达水平显著性上调(P＜0.05),Bcl-2的蛋白表达水平显著性下调(P＜0.05),细胞凋亡率显著升高[(8.30±0.68)％vs(34.29±3.16)％,P＜0.05];与诱导组相比,转染诱导组的m6A甲基化修饰水平显著性降低(P＜0.05),Mettl3的mRNA 和蛋白表达水平显著性下调(P＜0.05),IL-1[3(125.58±15.31ng/L vs 96.28±11.27ng/L)、IL-6(101.28±12.49ng/L vs 84.56±10.24ng/L)、TNF-α(204.37±23.65ng/L vs 147.15±18.46ng/L)和 MDA(9.23±1.05pmol/L vs 7.28±0.96pmol/L)水平显著性降低(P＜0.05),SOD(17.23±2.05U/mg vs 24.01±2.76U/mg)和 GSH-Px(83.35±9.05U/mg vs 121.48±15.47U/mg)水平显著升高(P＜0.05),且Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著性下调(P＜0.05),Bcl-2的蛋白表达水平显著性上调(P＜0.05),细胞凋亡率显著性降低[(34.29±3.16)％vs(23.57±2.01)％,P＜0.05].与空白组相比,转染组的炎性因子、氧化应激和凋亡水平均无显著性差异(P＞0.05).结论:H202可上调脊髓神经元中m6A甲基化修饰水平,并可诱导氧化应激和细胞凋亡;抑制Mettl3表达能够降低H202诱导的脊髓神经元m6A甲基化修饰水平,进而缓解氧化应激和细胞凋亡.
脊髓损伤、m6A甲基化修饰、Mettl3、细胞凋亡、氧化应激
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R338.2(人体生理学)
国家自然科学基金31960175
2022-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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