A型激酶锚定蛋白2基因表达对生长板软骨细胞功能的影响

摘要：

目的:探讨A型激酶锚定蛋白2(A-kinase anchoring protein 2,AKAP2)基因表达对生长板软骨细胞(growth plate chondrocytes,GPCs)增殖、分化及细胞外基质代谢的影响及作用机制.方法:设计AKAP2过表达和基因敲除质粒转染GPCs对AKAP2进行过表达或干扰,构建AKAP2过表达阴性对照组(Vector组)、AKAP2过表达组(AKAP2 OE组)、AKAP2干扰阴性对照组(si-NC组)、AKAP2干扰组(si-AKAP2组)和AKAP2 OE+U0126组[U0126:细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal regulated kinase 1/2,ERK1/2)通路阻滞剂],记录各组GPCs细胞增殖活力及钙盐沉积情况,检测细胞外基质中Ⅱ型胶原α1(collagen type Ⅱ alpha 1,C0L2A1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅱ型胶原(collagen type Ⅱ,COLⅡ)、增殖细胞核抗原(pro-liferating cell nuclear antigen,PCNA)和性别决定区Y框蛋白9(SRY-related high-mobility group box gene 9,SOX9)以及ERK1/2表达和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平,并进行统计学分析.结果:与Vector组相比,AKAP2 OE组细胞内AKAP2、ALP、COL2A1基因表达与AKAP2、PCNA、SOX9、ALP、COLⅡ蛋白表达及48h细胞活力、p-ERK1/2磷酸化水平均升高,橘红色钙结节显著增多,差异均有统计学意义(P＜0.05);与si-NC组相比,si-AKAP2组上述相应检测指标均呈降低趋势(P＜0.05).与AKAP2 OE组相比,AKAP2 OE+U0126组ALP、COLⅡA1基因表达和PCNA、SOX9、ALP、COLⅡ蛋白表达及48h细胞活力、p-ERK1/2磷酸化水平均降低,橘红色钙结节减少,差异均有统计学意义(P＜0.05);而ERK1/2基因表达均无显著性差异(P＞0.05).结论:AKAP2基因可以通过调控ERK1/2信号通路影响软骨细胞增殖、分化和细胞外基质代谢,并可能进一步改变正常的生长板软骨内成骨模式.

关键词：A型激酶锚定蛋白2、软骨细胞、增殖、分化、ERK1/2信号通路

所属期刊栏目：30

分类号：R322.7(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金青年基金;中南大学中央高校基本科研业务费专项资金资助

在线出版日期：2021-02-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1118-1128