四环素联合桂枝加葛根汤对髓核细胞增殖和相关因子表达的影响

摘要：

目的:探讨四环素(TET)联合桂枝加葛根汤(CK)对髓核细胞增殖和蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,Col2a)、基质金属蛋白酶13 (matrix metalloproteinase-13,MMP-13)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响.方法:体外分离培养8周龄健康雄性SD大鼠髓核细胞并进行鉴定.然后用药物处理分离成功的髓核细胞:TET组分别应用不同浓度(5,10,15,20,25μg/ml)的TET处理,CK组分别应用低、中、高剂量TET处理,TET+CK组应用20μg/ml TET和中剂量CK处理,对照组不添加药物.采用CCK8方法检测不同药物处理组细胞增殖活力;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测TET+CK组髓核细胞的aggrecan 、Col2a、iNOS和MMP-13的mRNA表达量,免疫印迹(Western blot)检测Aggrecan、Col2a、iNOS和MMP-13的蛋白表达量.利用pcDNA3.1-CMV(+)构建重组质粒pcDNA3.1-iNOS,转染组用pcDNA3.1-iNOS转染髓核细胞,应用20μg/ml TET和中剂量CK处理,空载体组用空载体(pcDNA3.1)转染细胞,应用20μg/mlTET和中剂量CK处理,对照组不添加药物且不转染,应用qRT-PCR检测各组iNOS和MMP-13的mRNA表达量,Western blot检测各组iNOS和MMP-13的蛋白表达量.结果:分离培养的髓核细胞Col2a和Aggrecan免疫组织化学染色阳性细胞比例分别为96％和98％.不同浓度TET或CK处理髓核细胞后细胞活力与对照组比较无显著性差异(P＞0.05).20μg/ml TET和中剂量CK联合作用后髓核细胞的活力、Aggrecan和Col2a的mRNA和蛋白表达量均较对照组显著性升高(P＜0.05),iNOS、MMP-13的mRNA和蛋白表达量较对照组显著性下降(P＜0.05).转染pcDNA3.1-iNOS重组质粒后髓核细胞iNOS和MMP-13的mNRA和蛋白表达与对照组和空载体组均显著性升高(P＜0.05).结论:TET联合CK可促进髓核细胞增殖,增加髓核细胞Aggrecan和Col2a mRNA和蛋白的表达,同时可以通过抑制iNOS减少MMP-13 mRNA和蛋白的表达量,为药物预防和治疗椎间盘退变提供了理论依据.

关键词：四环素、桂枝加葛根汤、髓核细胞、细胞增殖、大鼠

所属期刊栏目：28

分类号：R965;R691.5(药理学)

在线出版日期：2018-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：463-469