深低温保存温度及时间对椎间盘生物活性的影响

摘要：

目的:探讨深低温保存温度及保存时间对椎问盘生物活性的影响.方法:取1岁龄Beagle犬新鲜椎间盘72个,分为对照组(A组,n=8)、-80℃保存组(B组,n=32)和-196℃保存组(C组,n=32).B和C组在冷冻保存液中分别保存于-80℃低温冰箱及-196℃液氮中,在保存2w、2m、6m及12m时每组每个时间点取8个椎间盘,通过溴化吡啶/二乙酸荧光素(EB/FDA)荧光染色法检测椎间盘组织中不同部位的细胞存活率,以二甲基亚甲蓝(DMMB)染色法检测髓核组织蛋白多糖(PG)含量,以羟脯氨酸检测法测定纤维环组织中的总胶原含量;对照组取标本后直接进行以上检测.结果:B和C组椎间盘在保存至2w时各部位细胞存活率较A组明显下降,2m～12m保存期间,B、C两组椎间盘各部位的细胞存活率均维持在相对恒定的水平,但均较2w时下降;B组及C组外层纤维环细胞存活率在保存2w和2m时无明显差别(p>0.05),在保存6m及12m时C组明显高于B组(P<0.05);C组内层纤维环及髓核组织细胞存活率在各检测时间点均明最高B组(P<0.05).B、C两组在各检测时间点PG含量均较A组明显降低,在保存2m～12m期间,C组PG含量均高于B组(p<0.05).B、C两组总胶原蛋白含量在保存期间随时间逐渐降低.但两组问未见明显差异(P>0.05).结论:利用-196℃保存椎间盘组织,无论在细胞总的存活率及PG含量上均优于-80℃保存;-196℃保存12个月时椎间盘细胞存活率及PG含量均维持在相对稳定的水平,能满足同种异体椎间盘移植的要求.

关键词：椎间盘、深低温保存、细胞活性、细胞存活率

所属期刊栏目：21

分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：国家自然科学基金重点资助项目30730095

在线出版日期：2011-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：365-369