重组2型腺相关病毒-人骨形成蛋白7转染犬髓核细胞及其对髓核细胞表型的影响

摘要：

目的:观察重组2型腺相关病毒-人骨形成蛋白7(recombinant adeno-associated virus-2 expressing human bone morphogenetic protein-7,rAAV2-hBMP7)转染犬髓核细胞情况及其对细胞表型的影响.方法:用1岁龄Beagle犬L4/5椎间盘髓核进行髓核细胞体外培养,取第2代髓核细胞进行实验,实验组以rAAV2-hBMP7(1x105v.g/细胞)转染髓核细胞,对照组以重组2型腺相关病毒-增强型绿色荧光蛋白(recombinant adeno-associated virus-2 expressing enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)转染髓核细胞.在转染后4d、7d和14d以PCR检测髓核细胞中hBMP7的mRNA表达,在转染后7d和14d以Western blot法检测髓核细胞中hBMP7蛋白表达.在转染后4d、7d和14d采用RT-PCR法检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的mRNA含量,采用二甲基蓝及ELISA法分别检测蛋白多糖、Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白含量,结果:实验组髓核细胞表达hBMP7 mRNA及蛋白,并于转染后7d时表达量最高,而对照组无表达.实验组髓核细胞蛋白多糖mRNA及蛋白含量在转染后7d和14d 时较4d时明显增高,14d时较7d时亦明显升高(P<0.05),对照组各时间点无统计学差异(P>0.05);4d时实验组与对照组比较无明显差异,7d和14d时较对照组明显增加(P<0.05).同组各时间点Ⅰ型胶原mRNA及蛋白含量均无统计学差异,两组各时间点间比较无统计学差异(P>0.05).实验组髓核细胞Ⅱ型胶原mRNA及蛋白含量存转染后7d和14d时较4d时明显增高,14d时较7d亦明显升高(P<0.05).对照组各时间点无统计学差异(P＞0.05);实验组4d时与对照组比较无明显差异,7d和14d时较对照组明显增加(P<0.05).结论:rAAV2-hBMP7转染犬髓核细胞后能表达hBMP7蛋白,并能提高其蛋白多糖及Ⅱ型胶原含量.

关键词：基因转染、人骨形成蛋白7、重组2型腺相关病毒、髓核细胞

所属期刊栏目：20

分类号：R681.5;Q78(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：国家自然科学基金重点支持项目30730095

在线出版日期：2011-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：907-912