VEGF165过表达对BMP2成骨细胞分化影响的实验研究

摘要：

[目的]探讨腺病毒转染血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF165)对骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein 2,BMP2)促成骨细胞分化的抑制性作用研究.[方法]采用密度梯度离心法分离兔骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),取第3代BMSCs进行细胞表型鉴定并作为细胞实验对象,使用Ad-BMP2和Ad-BMP2-VEGF165载体体外转染BMSCs,倒置荧光显微镜下观察GFP表达变化;同时ELISA和Westem blot检测BMP2和VEGF165蛋白的表达.然后,应用成骨细胞诱导培养液定向诱导BMSCs向成骨细胞分化.实验分3组:Ad-BMP2-VEGF165转染BMSCs组(Ad-BMP2-VEGF165组),Ad-BMP2转染BMSCs组(Ad-BMP2组),BMSCs组(对照组).分别在成骨细胞诱导培养后7、14、21 d,通过Real-time PCR分析ALP和OC mRNA相对表达水平和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定、骨钙素(Osteocalcin,OC)免疫组化染色来评价各组BMSCs成骨分化潜能的影响. [结果]第3代细胞表面高表达CD29(99.82％)、CD44 (94.14％),低表达CD14 (3.11％)、CD34 (0.34％);腺病毒转染后第5 h BMP2和hVEGF165蛋白水平表达最高;成骨细胞诱导培养14和21 d后,Ad-BMP2组成骨相关基因表达、OC免疫组化和ALP活性表达最高,结果与其他两组相比较差异具有统计学意义(P＜0.05);而对照组表达最弱,与Ad-BMP2-VEGF165组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).[结论]腺病毒载体Ad-BMP2与Ad-BMP2-VEGF165转染BMSCs后,均具有明显促进BMSCs体外诱导成骨细胞分化潜能,但Ad-BMP2诱导作用更为显著,同时说明VEGF165可能对BMSCs成骨细胞分化起抑制作用.

关键词：骨形态发生蛋白2、血管内皮舒张因子165、骨髓间充质干细胞、成骨细胞、腺病毒载体

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分类号：R318(医用一般科学)

资助基金：山东省自然科学基金项目编号:ZR2010HM090,山东省高等学校科技计划项目编号:J14LL04

在线出版日期：2015-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：727-732