壳聚糖酶基因在软骨细胞中的表达及对壳聚糖介导基因转染的影响

摘要：

[目的]探讨携带壳聚糖酶(CSN)基因的重组慢病毒感染软骨细胞后影响CSN活性的因素,及CSN在壳聚糖(CS) /DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞中的作用.[方法]构建携带CSN和红色荧光带白(RFP)基因的重组慢病毒(LV-CSN)并感染兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测其感染率;二硝基水杨酸比色法(DNS)检测对CSN活性的影响因素;以CS/DNA纳米粒介导体外基因转染软骨细胞,检测CSN对CS/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞的作用.[结果]带RFP基因的LV-CSN感染软骨细胞后48 h和第7d,RFP表达率分别为(91.40±0.98)％和(91.67 ±1.00)％,二者差异无统计学意义(P=0.583).pH值、温度及铜离子浓度对CSN的活性有明显影响.LV-CSN感染软骨细胞后CS/DNA组的基因转染效率显著高于裸pDNA组和CS/DNA组(P＜0.05),但铜离子可以拮抗这种作用.[结论]在一定时间内LV-CSN感染软骨细胞后可稳定表达CSN,CSN的活性受pH值、温度及铜离子浓度的影响;CSN可提高CS/DNA对软骨细胞的基因转染效率,铜离子则可拮抗这种作用.

关键词：壳聚糖酶、壳聚糖、非病毒基因载体、基因转染、软骨细胞

所属期刊栏目：22

分类号：R687(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目编号:81272040;广东省自然科学基金资助项目编号:S2011010004808,S2013010016385;广东省科技计划基金资助项目编号:2012B031800451

在线出版日期：2014-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2089-2094