腺病毒载体搭载的TIMP-3基因对兔椎间盘基质的调节作用

摘要：

[目的]考察腺病毒载体搭载的重组人组织金属蛋白酶抑制因子-3基因(RAdTIMP-3)转染兔椎间盘后对椎间盘内主要基质成分质量的影响,并探讨其用于椎间盘退变治疗的可行性.[方法]扩增Lac-Z基因标记的RAdTIMP-3和重组腺病毒载体RAd66,并进行纯化、鉴定及滴度测定.将30只日本大白兔随机分入5组,分别向L4、5、L5、6椎间盘内注射生理盐水(第1组)、1.0×1010OPU/mlRAd66(第2组)以及1.0×1010OPU/mlRAdTIMP-3(第3、4、5组)各25 μl.各组分别于注射后2、2、1、2、4周收集标本,X-gal染色检测转染效率,RT-PCR检测TIMP-3及聚集蛋白聚糖核心蛋白的表达,TIMP-3及H型胶原免疫组化染色、藏红O-快绿染色及Tunel染色考察转染对椎间盘基质的调控作用.[结果](1)RAdTIMP-3经扩增和纯化后浓度可达1.9×10TM OPU/ml.(2)RT-PCR显示,3、4、5组TIMP-3基因表达均较1、2组明显增加,3、4、5组核心蛋白基因表达较1、2组略有增强.(3)Tunel染色显示各组凋亡细胞比例无明显差异.(4)第5组藏红O-快绿染色及II型胶原免疫组化染色染色强度均好于1、2组.[结论]RAdTIMP-3能够广泛而安全地在兔椎间盘内表达,并改善椎间盘基质成分的质和量,具备用于椎间盘退变治疗的潜力.

关键词：组织金属蛋白酶抑制因子-3、椎间盘、聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原

所属期刊栏目：17

分类号：R681(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：:a grant from the National Natural Sciences Foundation of China30700841

在线出版日期：2009-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：356-360