基于18S rRNA的胎毛滴虫感染PCR诊断方法的建立

摘要：

根据GenBank已发表的胎毛滴虫18S rRNA基因序列设计合成引物,建立胎毛滴虫PCR检测方法.以胎毛滴虫阳性重组质粒pUCm-T-TF18S为模板,以猫贾第虫基因组DNA、猫球虫基因组DNA、猫细小病毒基因组DNA、猫冠状病毒基因组cDNA为对照进行PCR检测,分析该方法的特异性.将胎毛滴虫阳性重组质粒以10倍为梯度稀释成8个不同浓度,进行PCR检测,分析该方法的敏感性.取分别置于-20℃3、6、9、12个月的pUCm-T-TF18S质粒进行PCR检测,分析该方法的稳定性.用建立的PCR检测方法对20份猫粪样进行检测,并与镜检结果进行对比.结果显示,重组质粒pUCm-T-TF18S PCR扩增后出现特异性条带.测序结果表明,产物序列长度为1 264 bp,经BLAST序列比对分析,与猫源胎毛滴虫(GenBank登录号M81842.1)序列一致性为99.53％.建立的胎毛滴虫PCR检测方法与猫球虫、猫贾第虫、猫冠状病毒、猫细小病毒均无交叉反应;可检测的最低模板浓度为4.52×105拷贝/μl;胎毛滴虫pUCm-T-TF18S质粒在-20℃冰箱放置12个月后仍可检测出目的条带.该方法从20份猫粪样中检出16份胎毛滴虫核酸阳性,较传统显微镜检查结果(13份)更为准确、敏感.提示建立的胎毛滴虫PCR检测方法特异性强、敏感性高、稳定性强,可用于临床上胎毛滴虫的检测与流行病学的调查.

关键词：猫、胎毛滴虫、PCR、诊断方法

所属期刊栏目：40

分类号：S852.722(动物医学（兽医学）)

资助基金：宁夏自然科学基金项目2021AAC03011

在线出版日期：2023-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：682-685