弓形虫感染后宿主细胞泛素化蛋白谱变化的特征分析

摘要：

目的 探究刚地弓形虫不同毒力虫株感染后宿主细胞泛素化蛋白谱变化的特点.方法 将人外周血单核细胞诱导成巨噬细胞后分为3组,分别为未感染组、RH感染组、ME49感染组.2个感染组分别用弓形虫不同毒力株(RH株与ME49株)速殖子感染4h后,收集3组细胞的总蛋白,应用泛素抗体富集泛素化蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白后进行蛋白定性质谱鉴定.检测完成后,搜索UniProt数据库中的人类数据库,利用Mascot鉴定蛋白质种类.蛋白质免疫印迹(Western blotting)分析蛋白CDC42的泛素化水平.利用DAVID数据库对感染组与对照组、不同毒力株感染组之间的显著差异性泛素化蛋白(DUP)进行基因本体(GO)注释和富集分析,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)在线网站对DUP进行信号通路富集分析,利用STRING 11.0在线网站对DUP进行蛋白-蛋白相互作用网络分析.结果 质谱筛选结果显示,RH感染组的特异性泛素化蛋白有194种,ME49感染组的有47种,两个感染组均筛选到的宿主泛素化蛋白有31种.Western blotting检测结果显示,宿主CDC42在弓形虫感染后泛素化水平显著升高.GO聚类分析显示,细胞组分聚类中,RH感染组的DUP主要涉及能量代谢以及蛋白质合成、加工的细胞器,有67个蛋白;ME49感染组的DUP则主要涉及细胞骨架结构,有11个蛋白;在生物进程聚类中两组差异不大,不同的是,ME49感染组的DUP富集到肝配蛋白受体信号通路(3个)和网格蛋白介导的内吞作用蛋白(2个);在分子功能聚类中,RH感染组的DUP主要富集在与RNA转录/加工、GTPase活性、泛素连接酶相关的聚类项,分别有47、7和11个蛋白;ME49感染组的DUP则主要富集在肌动蛋白丝结合(3个)等GO项上.KEGG信号通路富集显示,RH感染组的DUP主要富集在核糖体(12个)、泛素介导的蛋白水解(8个)、吞噬体(7个)、核苷酸切除修复(4个)、致病性大肠埃希菌感染(4个)等通路;ME49感染组的DUP则富集在核糖体(3个)、肌动蛋白细胞骨架调节(3个)和致病性大肠埃希菌感染(2个)的通路上.RH感染组DUP相互作用网络图主要的节点蛋白包括60S核糖体蛋白L9、蛋白质转运蛋白SEC61亚单位α亚型1以及RAS相关C3肉毒毒素底物1等.RH感染组与ME49感染组共有泛素化蛋白的相互作用网络图主要节点蛋白则有核糖体蛋白以及细胞分裂周期蛋白42等.结论 弓形虫感染引起宿主细胞的泛素化蛋白谱发生显著变化,与感染虫株的毒力相关;DUP包括细胞骨架、核糖体、泛素蛋白酶体途径的主要蛋白.

关键词：刚地弓形虫;泛素;细胞骨架;免疫逃避

所属期刊栏目：39

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家重点研发项目;国家自然科学基金面上项目;广东省科技计划项目;广州市科学研究计划重点项目

在线出版日期：2021-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：487-493