蓝氏贾第鞭毛虫滋养体体外诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成

摘要：

目的 通过定性和定量分析蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)滋养体对中性粒细胞胞外诱捕网的诱导能力.方法 采用中性粒细胞分离试剂盒提取健康人血中的中性粒细胞,与等数量贾第虫滋养体(均为4×105)加入2ml M199培养基中分别培养30、60、120、180、240 min,收集各时间段的培养上清,使用PicoGreen染色法定量检测上清双链DNA(dsDNA)的浓度,ELISA检测上清中髓过氧化物酶(MPO)的含量;另取中性粒细胞与贾第虫滋养体(均为4×105/ml)各200 μl为实验组,加至24孔板中,37℃混合培养4 h后,用蓝色荧光标记DNA、绿色荧光标记瓜氨酸化组蛋白H3、红色荧光标记MPO,激光共聚焦显微镜下观察中性粒细胞胞外诱捕网的形成情况;阳性对照组为100nmol/L佛波酯处理的中性粒细胞,阴性对照组为未处理的中性粒细胞.应用SPSS 19.0软件进行统计学分析,数据用独立样本t检验进行比较.结果 分离获得的健康人血中性粒细胞纯度达75％以上,镜下可观察到核呈杆状或分叶状的中性粒细胞.PicoGreen染色法检测结果显示,中性粒细胞和贾第虫滋养体等数量混合30、60、120、180、240 min后,上清中dsDNA吸光度(A530值)分别为7.30±1.12、11.15±1.10、21.69±2.71、26.35±2.26、29.29±3.27,均高于阴性对照组的3.79±0.48,且dsDNA浓度随着培养时间的延长而升高(P＜0.05).ELISA检测结果显示,阴性对照组、实验组和阳性对照组上清中MPO含量的A530值分别为0.209 4±0.018 2、0.611 5±0.060 7、0.721 7±0.087 9,实验组的 MPO含量高于阴性对照组(P＜0.05).激光共聚焦显微镜下观察到实验组的中性粒细胞和贾第虫滋养体之间有红色和绿色网状荧光物质存在,其中含有大量组蛋白和MPO.结论 贾第虫滋养体在体外具有刺激中性粒细胞释放胞外诱捕网的能力.

关键词：蓝氏贾第鞭毛虫;中性粒细胞;胞外诱捕网;免疫荧光

所属期刊栏目：39

分类号：R382.213(医学寄生虫学)

资助基金：河北省自然科学基金;华北理工大学大学生创新创业项目

在线出版日期：2021-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：455-460