云南省间日疟患者G6PD基因编码区的突变分析

摘要：

目的 分析云南省间日疟患者的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)基因编码区突变多态及其与伯氨喹性溶血现象易发的规律. 方法 收集云南省2018年经“氯喹/伯氨喹八日疗法”治疗的间日疟病例血样.以服用伯氨喹期间患者出现“茶色”尿液体征、G6PD酶活性下降判断为伯氨喹诱发急性溶血.提取血样的人基因组DNA,PCR分别扩增含G6PD基因的12个外显子片段并测序.与G6PD基因非突变型序列比对,用DNAStar11.0、BioEdit 7.2.5等软件整理、拼接测序序列获得G6PD基因的cDNA序列.用MEGA 5.04、DnaSP 5.10软件分析cDNA序列的突变多态、选择效应等.计算突变多态与伯氨喹诱发性溶血发生的相关性系数(r)和比值比(OR). 结果 共收集间日疟患者血样184份,获得44份血样的G6PD基因完整cDNA链(长度为1 545 bp),其中1条来自溶血病例的基因组.44条cDNA链与非突变型序列比对的突变位点包括c.461 T＞A、c.574 C＞T、c.786 C＞T、c.1059 C＞T、c.1311 T＞C和c.1376 G＞T,频率分别为1.5/10万、1.5/10万、1.5/10万、1.5/10万、45.6/10万和1.5/10万.c.1311和c.1376的双位点突变连锁仅存在于溶血病例的基因组,且c.1376位点突变与伯氨喹性溶血的发生为正相关关系(r=1.000,P＞0.05).44条cDNA链定义为6种单倍型(Hap_1～Hap_6),单倍型期望杂合度(He)、核酸多样性指数(π)、Ka/Ks比值分别为0.493、0.001和0.062;c.1311单点突变的Hap_2占比最多,为68.2％ (30/44),高频率突变位点c.1311的等位组成亦最复杂,出现非突变半合(9/44,20.4％)、突变半合(16/44,36.4％)、非突变纯合(5/44,11.5％)、突变杂合(10/44, 22.7％)、突变纯合(4/44,9.1％)等5种合子.c.1311位点突变与伯氨喹性溶血发生的OR值为0.6879 (P＞ 0.05),未显示关联性.Tjima's中性检验D值为-1.414 (P＞ 0.05),且全段的D值均＜1,表明研究序列检出的突变不属于定向选择压力下的非中性突变,Ka/Ks比值为0.062,说明研究序列非常保守、错义突变率低于同义突变率. 结论 云南省间日疟患者中,常见的G6PD基因编码区突变为c.1311位点的T＞C碱基替换,但仅c.1376位点的G＞T突变与氧化剂突变诱发性溶血的发生呈正相关性.

关键词：G6PD基因、编码区、突变、伯氨喹、影响、相关性

所属期刊栏目：38

分类号：R531.31(寄生虫病)

资助基金：云南省科技项目应用基础研究计划青年项目;国家自然科学基金;云南省疟疾研究中心项目

在线出版日期：2020-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：146-151