腐食酪螨的形态和分子特征鉴定

摘要：

目的 通过形态和分子特征鉴定腐食酪螨. 方法 从储存时间超过1年的面粉样品中分离螨虫,饲养后取卵、幼螨、若螨、成螨,分别在光镜和扫描电镜下观察其外部形态和超微形态并鉴定.提取螨虫DNA,PCR扩增细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(cox1)和内转录间隔区(ITS),将PCR产物分别连接载体pMD19-T,转化至大肠埃希菌,通过蓝白斑筛选后,取阳性克隆进行双向测序.序列测定后,采用DNAMAN软件拼接,所得序列用DNAStar软件分析碱基组成,同时与GenBank上已知的粉螨亚目粉螨进行BLAST比对分析,并构建系统进化树. 结果 光镜下可见螨体呈椭圆形,表皮光滑无色,半透明,螯肢和足略带棕色,躯体上的刚毛细长而不硬直.电镜下螨虫各发育阶段的足、刚毛和外生殖器及其附属结构的形态均清晰可辨.幼螨足3对,若螨和成螨足4对,螯肢1对,由3节构成,第Ⅳ基节之间可见扇形的生殖区,支持阳茎的侧骨片向外弯曲形成“人”字形,肛门细长,位于后半体,体末端肛后毛较长.第一背毛(d1)短,第二背毛(d2)较长,肩内毛(hi)比肩外毛(he)长,末端见明显的肛后毛(pa)超出躯体很多.前足体可见顶内毛(vi)和顶外毛(ve),胛内毛(sci)比胛外毛(sce)长,膝节上的膝外毛(o1)较膝内毛(o2)稍长.PCR扩增结果显示,cox1片段大小为469 bp,ITS片段大小为1 825 bp(MN545441).cox1序列经BLAST比对,确定为腐食酪螨.cox1碱基序列分析结果显示,A+T含量较高,为65.7％,与GenBank上已知的粉螨亚目中7种粉螨相似.基于cox1基因的同源性分析和系统进化树显示,腐食酪螨和长食酪螨亲缘关系最近,二者序列相似性为91.5％.ITS碱基序列分析结果显示,其A+T含量为53.6％,与GenBank上已知的粉螨亚目中7种粉螨碱基组成相似.同源性分析结果显示,腐食酪螨ITS序列与其他7种粉螨差距较大,序列相似性仅为37.7％～41.8％.系统进化树结果显示,腐食酪螨与长毛根螨亲缘关系最近. 结论 面粉样品中的螨虫经显微形态特征和cox1序列比对确定为腐食酪螨,其ITS序列可作为分子鉴定标记.

关键词：腐食酪螨、外部形态、分子特征

所属期刊栏目：38

分类号：R384.429(医学寄生虫学)

资助基金：安徽省自然科学基金面上项目;安徽省高校优秀青年人才支持计划重点项目

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：95-101