Cu2+胁迫对福寿螺金属硫蛋白基因mRNA表达的影响

摘要：

探讨不同浓度Cu2+胁迫对福寿螺肝胰腺组织金属硫蛋白(metallothionein,MT)基因表达的影响,取15只福寿螺,在100 μg/L Cu2+离子胁迫后的0、1、7、14、21 d,各取3只福寿螺,分离肝脏,提取RNA,反转录为cDNA,实时荧光定量PCR检测福寿螺金属硫蛋白基因(PcMT) mRNA的相对表达水平.以cDNA为模板,PCR扩增PcMT基因完整编码序列,连接至pET2ga质粒,转入大肠埃希菌BL21 (DE3)感受态细胞中,挑取阳性克隆进行鉴定与测序.用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物.结果 显示,Cu2+胁迫0～14 d,福寿螺肝脏中PcMT基因mRNA的表达量持续上升,峰值为2.1±0.2,21 d时下降为1.1±0.1.PCR扩增PcMT基因,获得长度约300 bp的片段,构建的pET28a-PcMT质粒经PCR、双酶切和测序鉴定,均与预期大小一致.SDS-PAGE结果显示,PcMT蛋白的相对分子质量(Mr)约为17 000.

关键词：福寿螺、Cu2+胁迫、金属硫蛋白、基因表达分析

所属期刊栏目：37

分类号：R383.19(医学寄生虫学)

资助基金：国家重点研发计划项目2016YFC1200500

在线出版日期：2019-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：375-378