刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶多克隆抗体的制备及鉴定分析

摘要：

目的 研制刚地弓形虫磷酸丙糖异构酶(TPI)兔多克隆抗体(多抗)并分析其诊断价值. 方法 在大肠埃希菌BL21重组表达菌表达TPI,镍柱亲和层析法纯化后与弗氏佐剂等体积混合,颈背部多点注射免疫新西兰大白兔(TPI 200 μg/次,共3次).末次免疫后2周收集兔血清,Protein A亲和层析纯化多抗.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析多抗纯度,ELISA分析多抗效价,蛋白质印迹(Westernblotting)及ELISA分析多抗识别弓形虫排泄分泌抗原及纯化TPI的效果.利用多抗偶联磁珠,富集11份弓形虫感染小鼠和11份健康小鼠血清后,Dot-blot分析多抗的诊断价值,并与弓形虫循环抗原ELISA试剂盒的检测结果作比较. 结果 表达并纯化获得条带单一的TPI蛋白.SDS-PAGE分析结果显示,免疫兔血清经Protein A亲和纯化后获得的多抗,重链与轻链清晰可见.第3次免疫后兔血清抗体效价可达1:280 000以上;纯化后的多抗纯度高,效价可达1:100 000以上;Western blotting分析结果显示,纯化的多抗能识别弓形虫排泄分泌抗原中的TPI及纯化的TPI,在相对分子质量(Mr) 28 000处均出现一特异性条带;ELISA分析结果显示,纯化的多抗能结合纯化的TPI,其A450值与TPI蛋白的包被浓度呈正相关.Dot-blot结果显示,11份感染鼠血清中10份鉴定为阳性,1份阴性;11份健康小鼠血清中10份鉴定为阴性,1份假阳性.弓形虫循环抗原ELISA试剂盒检测结果显示,11份感染小鼠血清中6份鉴定为阳性,5份阴性;11份健康小鼠血清均鉴定为阴性.Dot-blot与ELISA试剂盒检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 制备并纯化了弓形虫TPI多抗,该多抗具有潜在诊断价值,可用于开发免疫诊断试剂以检测弓形虫感染.

关键词：刚地弓形虫、磷酸丙糖异构酶、多克隆抗体、诊断

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分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：上海健康医学院教学建设项目2018037;上海健康医学院种子基金SFP-18-22-14-009;浦东新区科技发展基金PKJ2018-Y55;上海市卫生和计划生育委员会青年项目20174Y0124

在线出版日期：2019-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：311-315,320