粉尘螨过敏原Der f32的克隆、表达、免疫学鉴定及其对树突状细胞的调节作用研究

摘要：

目的 克隆、表达粉尘螨Der f 32蛋白,并鉴定其免疫原性及其对树突状细胞(DC)的调节作用. 方法 合成粉尘螨过敏原Derf 32基因,与pET-24a(+)载体连接,转入大肠埃希菌BL21诱导表达,经亲和层析法纯化后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白表达情况,蛋白质印迹(Western blotting)、临床皮肤点刺实验检测重组蛋白的免疫原性.将重组蛋白Der f 32与小鼠来源的DC2.4共培养24 h,设阳性对照组(加等量重组蛋白Der f 1)和阴性对照组(加等量PBS),流式细胞术检测细胞表面共刺激分子(CD40、CD83和CD80)的表达.将重组蛋白稀释为10、20、30、40、50、60 μg/ml等不同浓度,分别与DC2.4共培养48 h后,Western blotting分析T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域蛋白4(TIM4)的表达情况. 结果 SDS-PAGE结果显示,重组蛋白Der f 32相对分子质量(Mr)约35 000.临床皮肤点刺实验表明,42位尘螨过敏患者中有6例对重组蛋白Der f 32过敏,阳性率为14.2％.Western blotting结果显示,重组蛋白Der f 32能与皮试阳性患者血清IgE抗体特异性结合.流式细胞术检测结果显示,重组蛋白Der f 32与DC2.4共培养后,CD40、CD83、CD80的表达水平分别为24.5％、9.6％和24.6％,高于阴性对照组(11.9％、3.1％和15.6％) (P＜0.01),低于阳性对照组(38.2％、15.0％和39.1％) (P＜0.05).Western blotting检测结果显示,TIM4的表达量随重组蛋白Der f 32浓度的升高逐渐增加,且在Der f 32浓度为50μg/ml时,TIM4的表达量达到最高,TIM4相对灰度值为1.112. 结论 获得了具有较强免疫原性的粉尘螨新过敏原Der f 32,该蛋白能促进DC表面分子和TIM4的表达.

关键词：粉尘螨、Der f 32、免疫原性、树突状细胞

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分类号：R384.4(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金海外及港澳学者合作研究延续项目31729002;广州市科学研究计划重点项目201804020043;广东省科技计划产学研合作项目2014B090901041;广东省医学科学技术研究基金B2017081;深圳市孔雀计划团队项目KQTD20170331145453160;深圳市科技计划国际科技合作项目GJHZ2018041819053;深圳市科技计划基础研究项目JCYJ20160429171931438,JCYJ20160429114659119

在线出版日期：2019-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：279-285