大片形吸虫感染及其分泌排泄产物对小鼠Toll样受体mRNA表达量的影响

摘要：

目的 研究大片形吸虫感染及其分泌排泄产物对小鼠Toll样受体(TLRs) mRNA表达量的影响.方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为感染组和未感染组,每组20只.感染组每鼠经口灌喂大片形吸虫囊蚴20个,未感染组经口灌喂等体积PBS,分别于感染后1、4、7、14和28 d,每组各取4只小鼠进行剖杀.取小鼠肝脏组织,提取总RNA,逆转录为cDNA,qRT-PCR检测TLR1～9 mRNA的相对表达量.于感染的水牛肝脏中收集大片形吸虫虫体,PBS培养6h,收集自然活性的大片形吸虫分泌排泄产物(nFgESP).18只雌性BALB/c小鼠随机分为nFgESP组和PBS组,每组9只.nFgESP组每鼠经腹腔注射1 mg/ml nFgESP,对照组注射等量PBS,分别于注射后1、4、7d,每组各取3只小鼠进行剖杀.取小鼠肝脏组织,提取总RNA,逆转录为cDNA,qRT-PCR检测TLR1～9 mRNA的相对表达量.将nFgESP溶液95℃热处理15 min,制备热灭活的大片形吸虫分泌排泄产物(hiFgESP);分别用含25、50、100和200 μg/ml nFgESP或hiFgESP的PBS体外刺激小鼠RAW264.7细胞24h(细胞浓度为2×106个细胞/孔),设2个重复孔,3次重复实验,以等体积PBS为空白对照;收集各组细胞,提取细胞总RNA,逆转录为cDNA,qRT-PCR检测TLR1～9 mRNA的相对表达量. 结果 大片形吸虫感染小鼠实验结果显示,感染组小鼠7d后肝脏组织中TLR6和TLR7的mRNA相对表达量分别为2.9±0.3和2.5±0.5,均高于未感染组(1.0±0.2和1.3±0.5)(P＜ 0.01);14d后TLR1和TLR9的mRNA相对表达量分别为3.4±0.8和2.8±0.9,均高于未感染组(1.1±0.2和1.1±0.3) (P＜ 0.05或P＜0.01);28d后TLR1、TLR8和TLR9的mRNA相对表达量分别为3.8±1.3、4.2±1.5和3.1±0.9,均高于未感染组(1.0±0.2、1.2±0.4和1.1±0.3) (P＜0.01或P＜0.05).FgESP体内免疫小鼠实验结果显示,nFgESP注射1d后,小鼠肝脏组织中TLR1和TLR2的mRNA相对表达量分别为2.5±0.4和1.9±0.4,均高于PBS组(1.0±0.1) (P＜ 0.05或P＜0.01).FgESP体外刺激RAW264.7细胞实验结果显示,100 μg/ml nFgESP刺激下的TLR1、TLR3、TLR7和TLR8的mRNA相对表达量分别为1.6±0.0、1.4±0.0、1.6±0.0和1.9±0.0,均高于PBS组(1.0±0.0) (P＜0.05或P＜0.01);200 μg/ml nFgESP和hiFgESP刺激下的TLR8 mRNA相对表达量分别为3.4±0.0和4.0±0.5,均高于PBS组(1.0±0.0) (P＜ 0.01);100 μg/ml hiFgESP刺激下的TLR2和TLR8的mRNA相对表达量分别为1.5±0.1和2.0±0.0,均高于PBS组(1.0±0.0) (P＜ 0.01);25 μg/ml hiFgESP刺激下的TLR3mRNA相对表达量为0.6±0.0,低于PBS组(1.0±0.0) (P＜0.01). 结论 大片形吸虫可能通过其分泌排泄产物影响小鼠TLR1、TLR7和TLR8的转录,对宿主免疫应答进行调控.

关键词：大片形吸虫、分泌排泄产物、Toll样受体、实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：37

分类号：R383.26(医学寄生虫学)

资助基金：广西自然科学基金项目2016GXNSFAA380021

在线出版日期：2019-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：272-278,285