慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫体内的成功表达
目的 了解日本血吸虫(Schistosomajaponicum)体内能否表达外源绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),并产生绿色荧光.方法 构建pEGFP-LacZ-C1融合蛋白表达质粒,以聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为转染试剂,分别转染哺乳动物293T细胞和感染小鼠后14d的日本血吸虫童虫,未转染阴性对照组不做任何处理;转染后48 h,在荧光显微镜下观察被转染的293T细胞和日本血吸虫童虫是否有GFP绿色荧光产生;对被转染的293T细胞和日本血吸虫童虫进行β-半乳糖苷酶原位染色,在光学显微镜下观察是否有蓝色产物产生.同时,将日本血吸虫童虫放入培养293T细胞的12 孔板中,分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察.用未稀释的、滴度为3×108菌落形成单位(CFU) /ml的慢病毒体外感染日本血吸虫童虫和293T细胞96 h后,在荧光显微镜下观察是否有GFP绿色荧光产生.结果 pEGFP-LacZ-C1转染293T细胞后,可以观察到GFP绿色荧光,β-半乳糖苷酶原位染色后也可以观察到蓝色的斑点,而在对照组和日本血吸虫童虫中,均未观察到GFP荧光和蓝色斑点.日本血吸虫童虫和293T细胞GFP荧光的比较发现,293T细胞发出的GFP荧光亮度明显高于日本血吸虫童虫的自发荧光,且293T细胞GFP荧光为艳绿色,而日本血吸虫童虫的自发荧光为黄绿色.在慢病毒感染实验中,未稀释的慢病毒感染96 h后,在荧光显微镜下可以清晰地看到血吸虫肠道外围组织中有许多艳绿色的荧光亮点,日本血吸虫童虫GFP的颜色及亮度与293T细胞中的基本一致,且荧光亮点的移动与虫体的肌肉运动基本保持一致.结论 日本血吸虫童虫的背景荧光在外源GFP表达充足的情况下并不会影响荧光的观察.未稀释的慢病毒感染日本血吸虫童虫96 h后可提高转染效率,增加GFP表达量,在体内观察到GFP的绿色荧光.
日本血吸虫、绿色荧光蛋白、慢病毒载体
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R383.24(医学寄生虫学)
National Natural Science Foundation of China No.81271867国家自然科学基金81271867
2017-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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