慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫体内的表达和检测
目的 验证外源绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫(Schistosoma japonicum)体内能否成功表达并产生绿色荧光. 方法 采用荧光显微镜观察日本血吸虫不同虫期虫体的背景荧光情况.利用含有由巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的绿色荧光蛋白zsGreen基因的慢病毒载体感染体外培养的14 d童虫,未感染对照组采用不含慢病毒的RPMI 1640培养液(含10％胎牛血清)培养.感染后48 h,提取童虫基因组DNA和总RNA,合成cDNA,PCR检测zsGreen基因是否整合入基因组以及绿色荧光蛋白mRNA的转录表达情况.在感染后24和48 h,以及换为不含慢病毒的RPMI 1640培养液后的不同时间点,使用荧光显微镜观察被感染童虫发出的绿色荧光,并判断其是否为绿色荧光蛋白基因在虫体内表达而产生的绿色荧光信号. 结果 荧光显微镜观察可见,日本血吸虫童虫无明显自发荧光现象,成虫可自发明显荧光.感染组童虫基因组DNA和总cDNA PCR检测结果显示,均扩增出大小为173 bp的阳性条带,与zsGreen基因片段一致,且测序结果正确.荧光显微镜观察可见,而感染组童虫在感染后24h,肠道内出现绿色荧光亮点,但疑似食物残渣.感染后48 h,童虫肠道发出均匀的绿色荧光,其亮度高于慢病毒培养液的背景荧光亮度.更换为不含慢病毒的RPMI 1640培养液3d后,童虫肠道内绿色荧光变弱,一周后绿色荧光消失.重新更换为含慢病毒的RPMI 1640培养液感染童虫,2d后在肠道内再次发现均匀绿色荧光.未感染对照组童虫未出现绿色荧光. 结论 外源绿色荧光蛋白可在日本血吸虫体内表达,但荧光显微镜下观察到的绿色荧光信号还有待进一步确认.
日本血吸虫、绿色荧光蛋白、慢病毒载体
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R383.24(医学寄生虫学)
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2017-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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