常见嗜尸性蝇类蛹壳样品在种属分子鉴定中的应用
目的 探讨常见嗜尸性蝇类蛹壳样品在法医昆虫学种属鉴定中的应用价值. 方法 收集不同保存时间的嗜尸性蝇类成虫及其羽化后的蛹壳成套样品共55套,根据形态学特征鉴定为2科6属8种.以不同保存时间,将上述样品分为＜2年组(n=23)、2～5年组(n=20)和＞5年组(n=12).取单个成蝇胸部和空蛹壳,以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取各样品mtDNA,并测定其浓度和纯度.PCR扩增CO Ⅰ基因,获得CO Ⅰ基因序列Ⅰ和Ⅱ,分别截取498 bp和841 bp的序列.在GenBank数据库对所获序列作BLAST搜索,进行同源性比对分析. 结果 所有样品均成功提取了mtDNA.保存时间≤5年的成虫胸肌和＜2年的空蛹壳DNA浓度多在1.0～3.0μg/μl之间,ArJA 280值多在1.6～～1.8之间.保存时间＞5年的成虫胸肌和≥2年的空蛹壳DNA浓度多低于1.0μg/μl,A260/A280值多低于1.6.随着样品保存时间的延长,各样品DNA浓度均明显下降(P＜0.01).保存时间＜2年,成虫胸部样品和空蛹壳样品均成功扩增出CO Ⅰ序列Ⅰ和序列Ⅱ.随着保存时间的延长,扩增成功率明显下降,序列Ⅱ表现更为明显(P＜0.01).8种嗜尸性蝇类CO Ⅰ基因序列Ⅰ和序列Ⅱ分别有6个和7个种属的同源性比对结果完全正确且样品序列比对的Max ident值均＞97％. 结论 嗜尸性蝇类空蛹壳样品可作为mtDNA提取和种属比对的检材.
嗜尸性蝇类、蛹壳、种属鉴定
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R384.21(医学寄生虫学)
山东省高校证据鉴识重点实验室山东政法学院开放课题No.KFKT-201403;山东政法学院科技计划项目No.2014F15BSupported by the Opening Project of Shandong Provincial Key Laboratory of Evidence Identification in Colleges and Universities,Shandong University of Political Science and Law No.KFKT-201403 and the Science and Technology Planning Project of Shandong University of Political Science and Law No.2014F15B
2015-04-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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