刚地弓形虫强毒株棒状蛋白ROP18的克隆、表达和免疫反应性分析

摘要：

目的 克隆、表达刚地弓形虫棒状体蛋白ROP18基因(TgROP 18),并分析其免疫反应性. 方法 提取刚地弓形虫RH株基因组DNA,PCR扩增TgROP18基因.扩增产物经双酶切后连接入原核表达载体pET30a(+),重组质粒转化大肠埃希菌BL21 (DE3),阳性菌落加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白TgROP18的表达情况.以鼠抗弓形虫血清为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组蛋白的免疫反应性. 结果 PCR扩增获得TgROP18基因,长约1 665 bp,编码554个氨基酸,其中前47个氨基酸构成信号肽序列.菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒pET30a(+)-TgROP18构建成功.SDS-PAGE结果显示,经IPTG诱导获得相对分子质量(Mr)为59 800的可溶性重组蛋白TgROP18.Western blotting分析结果显示,该重组蛋白可被鼠抗刚地弓形虫的血清识别. 结论 重组蛋白TgROP18具有一定的免疫反应性.

关键词：刚地弓形虫、ROP18、原核表达

所属期刊栏目：30

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

在线出版日期：2013-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：446-449