用多肽-蛋白偶联方法制备抗恶性疟原虫抗体
目的 介绍一种多肽-蛋白偶联的流程,并用多肽-蛋白偶联产物制备抗疟原虫抗体. 方法 用化学连接剂Sulfo-EMCS在作为载体蛋白的铜绿假单胞菌重组去毒外毒素(rEPA)上加马来酰亚胺基团,用间接Ellman反应测定载体蛋白上所加的马来酰亚胺基团数量.用马来酰亚胺修饰的载体蛋白滴定Pfs48/45-158多肽[含恶性疟原虫表面蛋白48/45(Pfs48/45)第158～～173氨基酸序列,其N末端带有一个半胱氨酸残基],绘制滴定曲线并用线性回归进行曲线拟合,根据滴定曲线确定理论滴定终点,计算多肽与载体蛋白的偶联比(每摩尔载体蛋白所能结合的多肽的摩尔数).用过量的Pfs48/45-158多肽与马来酰亚胺修饰的rEPA进行反应,规模制备Pfs48/45-158-rEPA多肽-蛋白偶联物,偶联物用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.用所制备的Pfs48/45-158-rEPA偶联物免疫BALA/c小鼠,制备免疫血清.用ELISA测定免疫小鼠血清抗Pfs48/45-158多肽的抗体效价,用免疫荧光试验(IFA)测定免疫血清识别疟原虫的能力. 结果 通过化学连接剂在每摩尔rEPA上添加约6.94摩尔的马来酰亚胺基团.制备了偶联比约为7.33的Pfs48/45-158-rEPA多肽-蛋白偶联物.偶联物免疫小鼠激发出抗Pfs48/45-158多肽的高抗体应答,免疫血清抗Pfs48/45-158多肽的效价为12 500 ELISA单位(即吸光度A405值为1时的血清稀释度倒数),同时免疫血清可识别疟原虫. 结论 多肽-蛋白偶联是一种可用于制备抗疟原虫抗体的便捷方法,间接Ellman检测、滴定反应和SDS-PAGE分析构成了多肽-蛋白偶联物制备的质控方法,可更好地保证多肽-蛋白偶联物的质量和稳定性.
多肽、化学偶联、抗体、疟疾
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R382.312(医学寄生虫学)
国家自然科学基金81072498;教育部留学回国人员科研启动基金
2013-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
442-445
