刚地弓形虫14-3-3蛋白真核表达载体的构建与表达

摘要：

目的 构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体. 方法 用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测.以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR (RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质休法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物. 结果 根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区.RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99％.Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞. 结论 构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达.

关键词：刚地弓形虫、14-3-3蛋白、真核表达、生物信息学

所属期刊栏目：30

分类号：R382.5(医学寄生虫学)

资助基金：国家自然科学基金81071373;山东省自然科学基金ZR2009CM079;家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金SKLVEB2011KFKT005

在线出版日期：2013-02-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：438-441